En esta nota se presentan 4 trabajos sobre biopsia liquida. En algunos se hace referencia al estado del arte de las metodologías desde la extracción de ADN y su detección en diferentes plataformas, pasando por experiencias en uno de los cánceres que han sido muy estudiados por esta metodología (cáncer de pulmón). También se muestra un trabajo sobre aplicaciones más recientes como es el estudio de las vesículas extracelulares que son liberadas en diferentes enfermedades y fluidos de orígenes variados.

Biopsia líquida para detectar células tumorales circulantes: ¿Está lista para una propuesta de valor en medicina de laboratorio? Luis Enrique Cortés-Hernández, Zahra Eslami-S, Catherine Alix- Panabières. J Appl Lab Med. 2020 Sep 1;5(5):1027-1037.

Los efectos a largo plazo del cáncer en la calidad de vida del paciente y su carga económica son cuestiones importantes que deben abordarse. Por lo tanto, es fundamental evaluar las prioridades de los pacientes e investigar la propuesta de valor de las pruebas clínicas en este campo. La biopsia líquida mínimamente invasiva ha atraído mucha atención porque permite el muestreo en serie durante la progresión del cáncer y proporciona información biológica valiosa sobre la biología del tumor y la respuesta al tratamiento a través del análisis de analitos en la sangre, como las células tumorales circulantes (CTC). Para introducir el análisis de CTC en la práctica clínica diaria, aún es necesario establecer firmemente sus beneficios clínicos y su valor adicional para la toma de decisiones clínicas. Una propuesta de valor de la medicina de laboratorio de las aplicaciones médicas de CTC puede ayudar a abordar estas cuestiones. En esta revisión, analizamos la evidencia actual de una propuesta de valor de la detección, el aislamiento y la caracterización de CTC utilizando las tecnologías disponibles, y resumimos los requisitos no satisfechos para la integración total de las CTC en la vía de atención.

Vesículas extracelulares incorporadas a la biopsia líquida

Fiabilidad del análisis de biopsia líquida: una comparación entre laboratorios de la extracción y secuenciación de ADN tumoral circulante con diferentes plataformas. Thibaud Koessler, Viola Paradiso, Salvatore Piscuoglio, Ronny Nienhold, Liza Ho, Yann Christinat. Lab Invest. 2020 Nov;100(11):1475-1484.

La biopsia líquida, el análisis del ADN tumoral circulante (ctDNA), es una herramienta prometedora en oncología, especialmente en medicina personalizada. Aunque sus principales aplicaciones se centran actualmente en la selección y el ajuste de la terapia, el ctDNA también se puede utilizar para controlar la enfermedad residual, establecer el pronóstico, detectar recaídas y, posiblemente, evaluar a los individuos en riesgo. El ctDNA representa una proporción pequeña y variable del ADN libre circulante (ccfDNA) que, a su vez, está presente en una baja concentración en individuos normales, por lo que analizar el ctDNA es un desafío técnico. Recientemente han aparecido en el mercado varios sistemas comerciales, pero sigue siendo difícil para los profesionales comparar su rendimiento y determinar si arrojan resultados comparables. Como primer paso hacia el establecimiento de directrices nacionales para los análisis de ctDNA, cuatro laboratorios de Suiza se unieron a un ejercicio comparativo para evaluar la extracción de ccfDNA y el análisis de ctDNA mediante secuenciación. La extracción se realizó utilizando seis métodos distintos y produjo ccfDNA de igual calidad, adecuado para la secuenciación. La secuenciación de muestras sintéticas que contenían cantidades predefinidas de ocho mutaciones se realizó en tres sistemas diferentes, con resultados similares. En los cuatro laboratorios, las mutaciones se identificaron fácilmente hasta el 1% de frecuencia alélica, mientras que la detección al 0,1% resultó un desafío. La linealidad fue excelente en todos los casos y, si bien el rendimiento molecular fue superior con un sistema, esto no afectó la sensibilidad. Este estudio también condujo a varias conclusiones adicionales: primero, las pautas nacionales deberían concentrarse en los principios de buenas prácticas de laboratorio en lugar de recomendar un sistema en particular. Segundo, es esencial que los laboratorios validen minuciosamente cada aspecto de la extracción y la secuenciación, en particular con respecto a la cantidad inicial de ADN y la profundidad de secuenciación promedio. Finalmente, como el software resultó fundamental para la detección de mutaciones, los laboratorios deberían validar el rendimiento de los llamadores de variantes y los algoritmos subyacentes con respecto a varios tipos de mutaciones.

El análisis del ADN tumoral circulante (ctDNA) es una herramienta prometedora en oncología

Evaluación crítica en la práctica clínica habitual de la biopsia líquida para la prueba del estado del EGFR en el cáncer de pulmón de células no pequeñas: una experiencia en un solo laboratorio (LPCE, Niza, Francia). Simon Heeke 1, Jonathan Benzaquen 2, Véronique Hofman 3, Marius Ilié 3, Maryline Allegra 4, Elodie Long-Mira, et al. Clin Lung Cancer. 2020 Jan;21(1):56-65.e8

Antecedentes: La introducción de la biopsia líquida mediante ensayos basados en PCR en la práctica habitual ha tenido un fuerte impacto en el tratamiento del adenocarcinoma de pulmón con mutación del EGFR y ahora se utiliza comúnmente para la prueba de rutina de mutaciones del EGFR en ciertos entornos clínicos. Para evaluar si los supuestos beneficios de los ensayos basados en PCR son válidos en la práctica diaria en una institución clínica multicéntrica, evaluamos cómo las decisiones de tratamiento se ven afectadas por los ensayos basados en PCR para el análisis de mutaciones del EGFR a partir de muestras de plasma en un laboratorio centralizado (LPCE, Niza, Francia).

Pacientes y métodos: Se analizaron un total de 345 muestras utilizando la prueba de mutación del EGFR Cobas v2 aprobada por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los EE. UU. y 103 utilizando el kit de PCR de plasma RGQ de Therascreen EGFR durante 3 años (395 muestras de 324 pacientes). Once muestras de plasma se validaron de forma independiente utilizando Cobas en 3 instituciones, y 130 muestras se analizaron utilizando PCR digital Stilla. Se recogieron datos clínicos de 175 (54%) de 324 pacientes.

Resultados: Cobas fue superior al ensayo Therascreen y demostró una reproducibilidad del 100%. La PCR digital mostró solo un 48%, 83% y 58% de concordancia con Cobas para deleciones del exón 19, mutaciones L858R y mutaciones T790M, respectivamente. Las biopsias líquidas ayudaron a informar y cambiar el tratamiento cuando se produjo resistencia y permitieron la detección de mutaciones de EGFR en pacientes cuando los resultados del tejido de la biopsia no estaban disponibles.

Conclusión: Los ensayos basados en PCR son una prueba rápida y conveniente, que permite la detección de mutaciones primarias y secundarias de EGFR en el plasma. Cobas demostró ser una prueba confiable, mientras que la PCR digital produjo demasiados resultados no concluyentes para ser recomendada actualmente como un dispositivo de prueba principal.

El análisis del ADN tumoral circulante (ctDNA) es una herramienta prometedora en oncología

Declaración de consenso sobre vesículas extracelulares en biopsia líquida para el avance de la medicina de laboratorio. Xingli Dong, Yusheng Lin, Kai Li, Gaofeng Liang, Xiaoyi Huang, Jingxuan Pan, et al. Clin Chem Lab Med. 2024 Jun 19. doi: 10.1515/cclm-2024-0188.

Las vesículas extracelulares (VE) representan una clase diversa de vesículas de membrana a escala nanométrica liberadas activamente por las células. Estas VE se pueden subdividir en categorías como exosomas y microvesículas, según sus orígenes, tamaños y atributos físicos. Cabe destacar que se han detectado VE derivadas de enfermedades en prácticamente todos los tipos de fluidos corporales, lo que proporciona un perfil molecular completo de sus orígenes celulares. Como resultado, las VE están surgiendo como una valiosa incorporación a las técnicas de biopsia líquida. En esta declaración colectiva, los autores comparten sus perspectivas actuales sobre la investigación y el desarrollo de productos relacionados con las VE, con un compromiso compartido de traducir este nuevo conocimiento en aplicaciones clínicas para el cáncer y otras enfermedades, en particular como biomarcadores de enfermedades. El consenso en este documento gira en torno al reconocimiento general de los méritos, las preguntas sin resolver y los desafíos existentes en torno a las VE. Este manuscrito de consenso es un esfuerzo colaborativo dirigido por el Comité de Exosomas, la Sociedad de Marcadores Tumorales, la Asociación China contra el Cáncer, cuyo objetivo es acelerar el cultivo de avances científicos sólidos y clínicamente aplicables e impulsar el campo hacia adelante con mayor rapidez y eficacia.

Bibliografía

En inglés

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En español

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