RT-LAMP: una técnica de diagnóstico de COVID-19


Algunos comentarios sobre el trabajo de revisión de Dorian Thompson y Yu Lei, titulado Minireview: Progreso reciente en RT-LAMP habilitado para detección de COVID-19, publicado en Sensors and Actuators Reports (2020)100017.



La pandemia de la enfermedad del coronavirus 2019 (COVID-19) ha infectado a millones de personas en todo el mundo. El brote causado por el nuevo coronavirus (SARS-CoV-2) representa un gran riesgo para la salud pública. Por lo tanto, el diagnóstico rápido y preciso del virus juega un papel crucial en el tratamiento de la enfermedad y en salvar vidas. El método estándar actual, considerado como gold estándar para la detección de coronavirus es el método de reacción en cadena de polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR). Sin embargo, la prueba de RT-PCR de laboratorio para el SARS-COV-2 requiere las instalaciones propias de un Laboratorio de Biología Molecular y una formación sólida de los operadores, por lo que no se dispone de tantos laboratorios en el país y se ve exigida la capacidad de los mismos. Es de destacar que este método es importante no solo en la detección de virus sino también el seguimiento del enfermo. En consecuencia, la PCR isotérmica, como la amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP), ha surgido como una alternativa al método de RT-PCR.


Ventajas de la metodología LAMP


La metodología LAMP posee algunas ventajas fundamentales como la amplificación a una temperatura constante, que hace innecesario disponer de un termociclador, un resultado de la prueba algo más rápido mientras mantiene una buena sensibilidad y especificidad lo que lo hace adecuado fundamentalmente para el screening en la pandemia. Estos comentarios de ninguna forma significan emitir ningún juicio de valor sobre el desempeño de métodos, por ejemplo en relación a la robustez de los mismos o a la disponibilidad de controles o sobre el desempeño global de los equipos disponibles. Esta es una tarea del bioquímico al momento del uso de los equipos que debe hacer su propia experiencia y evaluar los métodos que selecciona.


En este trabajo se hace una revisión que comienza con una breve introducción del principio de funcionamiento del método LAMP y luego resume el progreso reciente en la detección de ARN viral del SARS-CoV-2 realizada por LAMP. Asimismo, discute los lineamientos de la investigación futura. Se trata de una revisión crítica que seguramente motivará a la comunidad para allanar el camino de una detección rápida y a gran escala del SARS-CoV-2.


Tabla comparativa de algunos métodos moleculares


Métodos moleculares
Ventajas
Limitaciones
PCR simple • Alta sensibilidad y especificidad.
• Resultados precisos y fiables.
• La sensibilidad puede verse afectada por protocolos no optimizados y por inhibidores de PCR.
• Requiere paso de purificación de ADN.
PCR múltiple • Alta sensibilidad y especificidad.
• Permite la detección simultánea de múltiples patógenos.
• La sensibilidad puede verse afectada por protocolos no optimizados y por inhibidores de la PCR.
• El diseño del cebador y otras condiciones de mPCR (por ejemplo, concentración de cebador, concentración de tampón de PCR y cantidades del ADN templete) son importantes.
RT-PCR • Mayor sensibilidad y especificidad que la PCR simple.
• Más rápido que los simples PCR y mPCR. Porque no se requiere procesamiento de productos post-amplificación.
• El ensayo se puede multiplexar.
• Permite análisis de alto rendimiento.
• Costoso.
• La sensibilidad puede verse afectada por la inhibición de la PCR.
• Se necesita personal capacitado.
LAMP • Muy buena sensibilidad y especificidad similar a PCR.
• Rentable.
• Simple.
• Funciona sin sistema de ciclación térmica.
• Diseño de impresión complicado.

Abreviado y modificado de: Law JW et al. Front. Microbiol Nov 2015. doi.org/10.3389/fmicb.2015.01227


Bibliografía


En inglés


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En Español


1: Bettin-Martínez A., Villareal-Camacho J, Cervantes-Acosta G, Acosta-Reyes J, Barbosa J, San Juan H. Evaluación de un método de amplificación isotérmica mediado por bucle para la detección rápida del virus sincicial respiratorio en niños con infección respiratoria aguda. Biomédica 2019;39:415-26. doi: 10.7705/biomedica.v39i2.4428


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3: Cancino Mesa JF, Vitón Castillo AA. Casí Torres J. Empleo de la RT-PCR en la detección del SARS-CoV-2. UMP. [In Press]:e574.


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