La armonización en microscopía


Se han publicado recientemente en ABCL recomendaciones generales para proporcionar estándares de trabajo e interpretación de imágenes con el objeto de disminuir la variabilidad de los resultados entre los laboratorios de la determinación de ANCA por IFI.



Vishnu es uno de los más poderosos dioses del hinduismo. Dentro de la complejidad de esta religión, este dios tiene múltiples atributos, entre ellos el control, la preservación, el conocimiento, el orden, la armonía y la perfección.


En la búsqueda de esos valores, quienes hemos trabajado utilizando el microscopio sabemos que, en muchos casos, es difícil lograr obtener la reproducibilidad de los resultados, hecho motivado por diversos factores. Para eso se han establecido controles de calidad internos y externos que permiten evaluar la validez de las pruebas realizadas en nuestro laboratorio.


Dentro de los métodos microscópicos están aquellos que se rigen por resultados dicotómicos (positivo-negativo) que en algunos casos suelen ser dependientes del operador (por ejemplo la coloración de Gram en Bacteriología), pero que son más fácilmente controlables que otros que se basan en la diferenciación de distintos matices de una misma coloración.


Herramienta diagnóstica


  • Microfotografía de un preparado obtenido por IFI de células HEp-2 para detección de AAN

La determinación de anticuerpos dirigidos a diferentes proteínas del citoplasma de los neutrófilos (ANCA) es utilizada en la clínica diaria como una herramienta diagnóstica en distintas formas de vasculitis de pequeños vasos y como apoyo diagnóstico de otras enfermedades.


La determinación de ANCA, habitualmente realizada por la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI), presenta cierto grado de complejidad en la definición de las imágenes de los distintos patrones, lo que sumado a la variabilidad en la forma de trabajo y a la diferente forma de expresión de los resultados conduce a la falta de reproducibilidad de los mismos (1).


El 24 de octubre de 2018 en el marco del X Congreso Argentino de la Calidad en el Laboratorio Clínico y VIII Jornadas Latinoamericanas de la Calidad en el Laboratorio Clínico, en la ciudad de Buenos Aires, se realizó una reunión de Armonización de la Determinación de ANCA por IFI con el objeto de presentar, discutir y consensuar los distintos aspectos que se presentaban en esta técnica. Las propuestas iniciales fueron discutidas arribándose a recomendaciones generales para proporcionar estándares de trabajo e interpretación de imágenes con el objeto de disminuir la variabilidad de resultados entre los laboratorios. Estas recomendaciones fueron motivo de una publicación reciente en ABCL en la que se describieron los pasos críticos de la técnica para poder establecer métodos de estandarización y facilitar la implementación de controles de calidad (1).


Por otra parte, la IFI realizada sobre células HEp-2 es el método de referencia para la detección de anticuerpos antinucleares (AAN). Su alta sensibilidad diagnóstica permite la detección de más de 30 diferentes patrones de fluorescencia, correspondientes a distintas especificidades de autoanticuerpos. Sus principales limitaciones son su baja especificidad, el tiempo que consume y su bajo nivel de armonización incluso dentro del mismo laboratorio. Para ello, recientemente se han creado sistemas automatizados asistidos a través de computadoras que ofrecen una lectura cuantitativa más estandarizada. Estos sistemas son capaces de adquirir, analizar y almacenar las imágenes de la señal de fluorescencia en forma totalmente automatizada (2). Este es un nuevo avance en la estandarización de estas técnicas de compleja interpretación, pero igualmente, estos sistemas están sujetos a controles ya que no eliminan totalmente los errores dependientes del operador.


Referencias bibliográficas


1. Carballo OG, Ginaca A, Ingénito FB, et al. Armonización de la determinación de ANCA por inmunofluorescencia indirecta: primera reunión argentina. Acta Bioquím Clín Latinoam 2021; 55 (2): 151-63.


2. Cinquanta L, Bizzaro N, Pesce G.` Standardization and quality assessment under the perspective of automated computer-assisted HEp-2 immunofluorescence assay systems. Front Immunol 2021 Feb 25; 12: 638863.


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